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一半以上色譜柱的失效問題都是堵塞造成的。因此提高色譜柱使用壽命的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)就是用規(guī)格為0.2微米的濾膜預(yù)先過濾移動(dòng)相和樣品。
另一個(gè)重要方面是移動(dòng)相和填料的相容性。標(biāo)準(zhǔn)反相固定相填料在1.5-9的pH值區(qū)間內(nèi)表現(xiàn)都很穩(wěn)定。在特定條件下(有機(jī)緩沖溶劑作為移動(dòng)相)固定相填料甚至在pH值高達(dá)12的情況下仍能保持一定的化學(xué)穩(wěn)定性。通常情況下,對于硅膠基質(zhì)固定相,有機(jī)緩沖溶劑要比像磷酸鹽或者碳酸鹽類無機(jī)緩沖液顯得更溫和。如果既定方案需要您在高pH值條件下進(jìn)行色譜操作,請選擇能耐受pH值達(dá)到12的產(chǎn)品。
此外,應(yīng)避免含有緩沖成分的移動(dòng)相在色譜柱內(nèi)靜置停留的時(shí)間超過10分鐘。此時(shí),要么選擇一個(gè)非常緩慢的流速(在內(nèi)徑為4.6毫米的色譜柱上選用0.1毫升/分鐘的移動(dòng)相流速)而不是暫時(shí)關(guān)停色譜流,要么將含有緩沖成分的移動(dòng)相就地?fù)Q成非緩沖移動(dòng)相(比如,水/乙腈70/30)。以避免移動(dòng)相中緩沖鹽份析出而造成色譜柱的堵塞。